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      质粒纯化试剂盒

    1. Assay试剂盒

      2. 发布时间 ：2020-10-15 11:44   咨询量：
      3. 英文名称：Plasmid Purification Kit
      4. 产品货号： K003
      12. 简介：js3333线路检测中心生物质粒纯化试剂盒用于提取高质量的质粒DNA，可用做真核生物转染和体外表达的分子生物学实验，基于SDS碱性裂解方法 ，并通过使用硅胶膜结合柱为提取和纯化提供了快速操作。
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      产品详情
      名称：Plasmid Purification Kit
      介绍：js3333线路检测中心生物质粒纯化试剂盒旨在提取高质量的质粒DNA ，用于真核生物转染和体外表达的分子生物学实验。该试剂盒基于SDS碱性裂解方法，并通过使用硅胶膜结合柱为提取和纯化提供了快速操作。使用该试剂盒，可以在不到1小时的时间内分离出质粒DNA，其纯度为A260 / A280> 1.86，从而大大减少了提取时间并实现了高纯度。
      货号： K003
      存储 ：1.回收柱CM应干燥保存，并应在室温（15-25℃）下使用 。它们可以保存至少2年，而不会降低性能、容量或分离质量 。
      2.js3333线路检测中心生物的质粒试剂盒应在室温下保存 。加入RNase A后，缓冲液P1应在2-8℃下保存 ，并稳定6个月 。其他缓冲液和RNase A储备溶液可以在室温下保存2年。
      套件组分 ：
      规格 50次实验 200次实验
      缓冲液P1 15ml（毫升） 60ml（毫升）
      缓冲液P2 15ml（毫升） 60ml（毫升）
      缓冲液N3 20ml（毫升） 80ml（毫升）
      缓冲液PB 25ml（毫升） 100ml（毫升）
      缓冲液PE 15ml（毫升） 60ml（毫升）
      缓冲液EB 10ml（毫升） 30ml（毫升）
      RNase A（10毫克/毫升） 150ul（微升） 600ul （微升）
      回收柱CM 50 200

      操作步骤 ：1.将1.5 ml培养物添加到离心管中，并以12,000 rpm离心1分钟，并弃去上清液。
      2.向离心管中加入250ul 缓冲液P1（包括RNase A）并重悬细菌细胞。注意：重悬沉淀后，确保没有细胞团可见。
      3.向离心管中加入250ul 缓冲液P2 。轻轻倒转试管6至8次进行混合。注意：必须轻柔地进行第3步 ，否则基因组DNA可能会破裂。如有必要，可将离心管倒转6次以上直至溶液澄清 ，并确保将反应时间限制在5分钟以内。
      4.加入350ul 缓冲液N3。盖上盖子并轻轻颠倒6至8次进行混合。
      5.将试管以12,000 rpm的转速离心10分钟，然后会出现白色球形颗粒。
      6.将上清液转移到柱收集管中 ，并以12,000 rpm离心柱收集管1分钟，然后丢弃过滤后的溶液。
      7.用PB Buffer清洗色谱柱收集管 。向柱收集管中添加500ul PB缓冲液，并以12,000 rpm离心30至60秒，然后弃去过滤的溶液。
      8.用PE缓冲液清洗色谱柱收集管 。向柱收集管中添加750ul PE缓冲液 ，并以12,000 rpm离心30至60秒，然后弃去过滤的溶液。
      9.重复步骤8 ，再次清洗色谱柱收集管 。
      10.消除残留的PE缓冲液。将步骤9的色谱柱收集管在12,000 rpm的转速下离心2分钟，然后将色谱柱打开盖并暴露在空气中5分钟以挥发PE缓冲液。注意：残留的PE缓冲剂可能会抑制后续反应并导致提取失败 。
      11.将离心柱转移到透明的离心管中。要洗脱DNA，请在柱膜中央添加50-100 µl EB缓冲液（1 0 mM Tris•Cl，pH 8.5）或水（pH 7.0–8.5） ，将柱静置1分钟，然后离心。柱1分钟。重要 ：确保将洗脱缓冲液直接分配到柱膜上，以完全洗脱结合的DNA 。洗脱效率取决于pH。在pH 7.0和8.5之间达到最大洗脱效率。使用水时，请确保pH值在此范围内 ，并将DNA储存在-20°C，因为在没有缓冲剂的情况下DNA可能降解 。纯化的DNA也可以在TE缓冲液（10 mM Tris•Cl，1 mM EDTA  ，pH 8.0）中洗脱，但是EDTA可能会抑制随后的酶促反应 。
      原理：js3333线路检测中心生物质粒纯化方案基于改良的碱裂解程序，然后在适当的低盐和pH条件下将质粒DNA与树脂结合 。RNA ，蛋白质 ，染料和低分子量杂质可通过中盐洗涤去除。质粒DNA在高盐缓冲液中洗脱 ，然后浓缩并通过异丙醇沉淀脱盐。
      产量的确定 ：为了确定产量，应该通过260 nm的紫外分光光度法和琼脂糖凝胶上的定量分析来确定DNA浓度。为了进行可靠的分光光度法DNA定量，A260读数应介于0.1和1.0之间。
      琼脂糖凝胶分析 ：我们建议在纯化过程中取出并保存等分试样。如果质粒DNA的产量或质量较低，则可以通过琼脂糖凝胶电泳对样品进行分析，以确定出现问题的纯化步骤。
      安全事项 ：使用化学药品时 ，请始终穿着实验服，一次性手套和护目镜。
      故障排除指南 ：
      问题 原因   意见建议
      DNA产量低 细胞裂解不良 在添加缓冲液P2之前  ，细胞可能尚未充分分散。确保涡旋细胞悬浮液使其完全分散。
      增加与缓冲液P2的孵育时间以获得清晰的裂解物 。
      细菌克隆生长过度或不新鲜 在37℃下不要将培养物孵育超过16小时。在质粒分离之前，将培养物长时间保存是有害的。
      洗脱效率低 洗脱缓冲液或水的pH值必须≥8.0。
      没有DNA洗脱 TE Buffer不能用无水乙醇稀释 根据制备2准备DNA洗涤缓冲液浓缩液。
      产品的高分子量DNA污染 加入缓冲液P2后 ，细胞裂解液过度混合 添加缓冲液P2后，请勿涡旋或剧烈混合 。
      琼脂糖凝胶上可见的RNA RNase A未添加到缓冲区P1 检查是否已使用试剂盒随附的RNaseA 。如果缓冲液P1已使用6个月，则添加更多的RNaseA
      加载琼脂糖凝胶时质粒DNA浮出孔 在步骤10中，乙醇尚未完全从离心塔中除去 洗脱前，将离心柱在空气中暴露更多分钟以干燥色谱柱。

      

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