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      PCR纯化和胶回收快速试剂盒

    1. Assay试剂盒

      2. 发布时间：2020-10-15 11:46   咨询量：
      3. 英文名称：Quick PCR Purification and Gel Extraction Kit
      4. 产品货号：K004
      12. 简介 ：js3333线路检测中心生物PCR纯化和胶回收快速试剂盒是PCR反应设计，试剂盒中的缓冲液经过特殊优化，可在每种特定应用中有效回收DNA并去除污染物，用于分子生物学实验 。
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      产品详情
      名称：Quick PCR Purification and Gel Extraction Kit
      介绍：js3333线路检测中心生物快速试剂盒是PCR反应设计，从标准或低浓度琼脂糖凝胶中提取70bp至10kb的高质量DNA ，用于分子生物学实验。每个旋转柱最多可处理400mg琼脂糖凝胶 。
      货号：K004
      存储：js3333线路检测中心生物快速试剂盒应在室温（15-25℃）下干燥存放。在这种情况下，js3333线路检测中心生物快速试剂盒可以保存长达12个月，而性能和质量均不会降低。使用前检查缓冲液是否沉淀，必要时在37°C溶解。整个试剂盒可保存在2至8°C，但在这种情况下 ，应在使用前重新溶解缓冲液 。使用时，请确保所有缓冲液和离心柱均处于室温。
      套件组分 ：
      规格  50次测试 200次测试
      PB缓冲液（用于PCR纯化） 15ml（毫升） 60ml（毫升）
      QG缓冲液（用于凝胶提取） 30ml（毫升） 120ml（毫升）
      缓冲液PE 15ml（毫升） 60ml（毫升）
      旋转柱CM 50 200

      原理：js3333线路检测中心生物快速试剂盒将旋转柱技术的便利性与独特设计的硅胶膜的选择性粘合的性能结合在一起 。试剂盒中的缓冲液经过特殊优化，可在每种特定应用中有效回收DNA并去除污染物 。在高浓度盐存在下 ，DNA吸附到硅胶膜上 ，而污染物则通过色谱柱。有效去除杂质 ，并用TE缓冲液或纯净水洗脱DNA。
      安全事项：使用化学药品时，请始终穿着实验服，一次性手套和护目镜。
      缓冲剂PB含有盐酸胍 ，与漂白剂结合后可形成强氧化性化合物。如果溅到了含有该缓冲液的液体 ，请用实验室清洁剂和水清洗。如果溢出的液体含有潜在的传染源，请先用实验室清洁剂和水清洁患处 ，然后再用1％（v / v）的次氯酸钠清洁。
      程序：1.要进行PCR纯化 ，请在1份PCR样品中加入5份PB缓冲液并混合。例如，将500 µl的PB缓冲液添加到100 µl的PCR样品中 。然后执行步骤3。
      2.要进行凝胶提取，请用干净，锋利的手术刀从琼脂糖凝胶上切除DNA片段。在无色试管中称量凝胶切片 。将3体积的Buffer QG加到1体积的凝胶中（100 mg〜100 µl）。对于> 2％的琼脂糖凝胶，添加6体积的Buffer QG。每列的最大凝胶切片量为400 mg。
      在50°C下孵育1 0分钟（或直到凝胶切片完全溶解）。为了帮助溶解凝胶 ，请在孵育过程中每2-3分钟涡旋离心管进行混合。
      重要提示：完全溶解琼脂糖。对于> 2％的凝胶 ，请增加孵育时间。
      凝胶切片完全溶解后 ，向样品中加入1凝胶体积的异丙醇并混合，然后进行步骤3。
      3.将离心柱放在随附的2 ml收集管中 。
      4.要结合DNA ，将样品应用于色谱柱并离心30-60 s。
      5.丢弃流通。将色谱柱放回同一管中 。
      对于凝胶提取，建议：将0.5 ml Buffer QG加入柱中并离心1分钟。此步骤将除去所有痕量的琼脂糖 。纯化的DNA用于直接测序 ，体外转录或显微注射时才需要进行此步骤。
      6.要洗涤，请在色谱柱中加入0.75 ml Buffer PE ，并离心30–60 s 。
      7.丢弃流通液，然后将色谱柱放回同一管中 。将色谱柱再离心1分钟。重要提示 ：除非在此步骤前将离心处理前的流出物丢弃，否则缓冲液PE中的残留乙醇将无法完全去除。
      8.将色谱柱放入干净的1.5 ml微量离心管中 。
      9.要洗脱DNA，在柱膜中心添加50 µl EB缓冲液（1 0 mM Tris•HCl ，pH 8.5）或水（pH 7.0-8.5），静置1分钟，然后离心分离1分钟。重要 ：确保将洗脱缓冲液直接分配到柱膜上，以完全洗脱结合的DNA。洗脱效率取决于pH。在pH 7.0和8.5之间达到最大洗脱效率 。使用水时 ，请确保pH值在此范围内，并将DNA储存在-20°C，因为在没有缓冲剂的情况下DNA可能降解。纯化的DNA也可以在TE缓冲液（1 0 mM Tris•HCl，1 mM EDTA，pH 8.0）中洗脱 ，但是EDTA可能会抑制随后的酶促反应。
      故障排除指南：
      问题 原因 意见建议
      回收DNA浓度低或无
      DNA      		 缓冲液PE不包含乙醇 使用前必须将乙醇添加到缓冲液PE中 。使用正确准备的缓冲液PE重复该步骤。
      洗脱缓冲液不合适 只有在低盐缓冲液（缓冲液EB：10 mM Tris•Cl ，pH 8.5）或水存在下，DNA才能被有效洗脱。
      洗脱缓冲液分配不正确 在柱膜的中央添加洗脱缓冲液以确保缓冲液完全覆盖膜，这在使用小体积洗脱液时尤为重要 。
      PCR产物不足/没有PCR产物（用于PCR纯化） 在琼脂糖凝胶上纯化前后 ，通过运行10％的PCR产物估算DNA回收率。
      凝胶未完全溶解（用于凝胶提取） 在凝胶切片中加入Buffer QG后 ，在50°C孵育过程中每2–3分钟涡旋离心管进行混合 。DNA将保留在任何未溶解的琼脂糖中 。
      电泳缓冲液的pH值太高（用于凝胶提取） 电泳缓冲液已被重复使用或制备不正确，导致样品pH值超过缓冲液QG的缓冲能力，导致DNA结合效率低下。向样品中加入10ul 3 M乙酸钠，pH 5.0 ，并混合。
      凝胶片太大（> 400毫克）（用于凝胶提取） 从每列≤400 mg凝胶切片中只能获得70–80％的回收率。
      DNA表现不佳（例如，在连接反应中）
             		 洗脱液中的盐浓度过高 加入750ul 缓冲液PE ，然后在室温下将色谱柱在室温下孵育5分钟，以修改洗涤步骤 。
        洗脱液中含有残留的乙醇 确保洗涤液从收集管中排出，然后将色谱柱以1 3,000 rpm的转速再离心1分钟 。
        洗脱液被琼脂糖污染（用于凝胶提取） 凝胶切片未完全溶解或重量> 400 mg 。重复此过程，包括可选的Buffer QG柱洗涤步骤。
        洗脱液中含有引物二聚体 形成的引物二聚体> 20 bp ，未完全去除 。结合步骤后，用750ul 的35％盐酸胍水溶液（35 g在1 00 ml中）洗涤色谱柱 ，继续执行方案中的Buffer PE洗涤步骤和洗脱步骤 。
        洗脱液含有变性的ssDNA ，在分析凝胶上显示为较小的条带 使用洗脱的DNA准备后续的酶促反应 ，但省略酶。要重新退火ssDNA ，请将反应混合物在95°C下孵育2分钟，然后将试管缓慢冷却至室温。加入酶并照常进行。或者，可以在含有10 mM NaCl的10 mM Tris缓冲液中洗脱DNA。盐和缓冲剂可促进DNA链的复性 。但是，随后必须考虑洗脱液的盐浓度。

      

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