保存蛋白质应该遵循下面这几个基本原则:

1. 低温

保存蛋白质时，确保在低温条件下至关重要
。低温意味着较低的能量水平
，有助于减缓蛋白质分子内部的热运动
，减少键的断裂可能性
。此外
，在低温下，微生物繁殖减缓，潜在的蛋白酶活性降低，从而有助于维持蛋白质的活性。

2. 无菌

在进行蛋白质实验操作时，务必佩戴手套
。尽管实验室戴手套通常是为了保护实验者自身，但在生化实验中，蛋白质是我们需要保护的主体。我们皮肤上存在一些蛋白酶，可能会降解蛋白样品。此外，皮肤上的其他化学物质也可能污染蛋白样品
。为了防止细菌生长
，最好将蛋白质保存在经过灭菌处理的容器中。

3. 浓度

为了提高蛋白质的稳定性
，建议以较高浓度保存重组蛋白质，最好保持在1mg/ml以上
。高浓度有助于防止蛋白质分子附着在塑料或玻璃管壁上。不容忽视的是，疏水性蛋白质容易附着在管壁上
。

4. 分装

蛋白质需要冷冻保存，但在实验中常在室温或更高温度使用。反复冻融过程中产生的冰晶会损害蛋白质的结构和构象。为减少冻融次数，建议将纯化后的蛋白质进行分装保存，每次使用前融化所需量
，以确保蛋白质样品经历单次冻融。

5. 速冻／速融

在蛋白质溶冷冻时
，为了减少蛋白质分子在高盐度或pH条件下的曝露时间，可选择速冻方法。速冻可通过液氮实现
。速冻后
，蛋白质可以存放在-20°C或-80°C中，同样，蛋白质的快速融化也是至关重要的
，可在温水中进行。

6. 避免震荡

震荡产生的剪切力可能对蛋白质造成破坏。在震荡时，液体中会生成气泡
，导致氧气进入，使蛋白质处于氧化环境中。由于蛋白质中的半胱氨酸容易被氧化为胱氨酸
，这一过程可能破坏蛋白质的活性。

7. 添加剂

为了确保蛋白质的稳定性，需要将其保存在适当的缓冲液中
，并添加一些保护剂
。例如，在-20°C保存时，可添加10%-50%的甘油防止结冰，避免冻融过程
。此外，还可添加防腐剂抑制细菌生长，或蛋白酶抑制剂（PMSF）以防止蛋白酶对蛋白质的破坏。同时，添加一些还原剂如DTT可防止蛋白质氧化。在选择添加剂时，务必确保其不会影响蛋白的活性。

蛋白质的保存方法取决于其稳定性以及再次使用的时间。

对于冻干状态的重组蛋白，由于处于完全脱水的状态
，在不受潮的情况下可以在冰箱中保存数年。

对于复融后的重组蛋白


，比较合适的保存方式是分装后保存在 -20°C 或 -80°C，六个月内一般是没有问题的。

（1）分装有助于最大程度减少反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害，并减少从同一管中多次吸取可能导致的污染
。

（2）分装的量最好按一次实验用完为准，每份至少不能少于10 µl。体积越小，蛋白浓度受蒸发和管壁吸附影响的可能性越大

。

（3）复融后的分装重组蛋白如果一次用不完，将剩余母液保存在 4℃，避免再冻起来。

（4）蛋白工作液应当在当天配制并当天使用
，最好不要在4℃超过1天。

对于短期保存，大多数蛋白质可以在4°C下保存，以避免反复冻融对活性的影响。然而
，4°C保存面临微生物污染的问题

。因此，如果保存时间超过24小时，建议使用0.22微米的滤膜过滤样品，然后在无菌管中保存
。值得注意的是
，并非所有蛋白质都适合在4°C下保存。