IP实验原理
IP又称免疫沉淀(Immunoprecipitation),是利用抗原和抗体的特异性结合以及“proteinA/G”特异性结合到抗体的FC片段的现象开发出来的方法,简单来说,抗原与抗体类似于锁和钥匙之间的关系,一把钥匙(抗体)只能开一把锁(抗原),而钥匙可以通过钥匙链(细菌蛋白的“proteinA/G”)快速找到。ProteinA/G抗体-目的蛋白复合物从混合液中沉淀下来,最后将靶蛋白从磁珠上洗脱,并通过SDS-PAGE,Western Blot等手段对洗脱下来的蛋白进行分析。
IP是用来富集目的蛋白的,那么在生物体内蛋白一般可能会与什么结合呢?
这个我想大家都知道,那就是DNA、RNA、蛋白质。通过IP的方法富集蛋白,检测与其结合的DNA的方法即为ChIP;通过IP的方法富集蛋白,检测与其结合的RNA的方法即为RIP;通过IP的方法富集蛋白,检测与其结合的蛋白的方法即为coIP。
CoIP又叫免疫共沉淀,利用抗原A与蛋白质B结合,通过A的抗体(钥匙)沉淀A(锁),再利用精制的proteinA(钥匙链)预先结合到磁珠上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,磁珠上的proteinA就能吸附抗体,从而获得抗原A与抗原B的结合体,之后就可以对B检测,获得蛋白质之间的相互作用信息。
RIP又叫RNA免疫沉淀,利用抗原A与RNA B结合,抗原A的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化对RNA进行测序或PCR分析,就可以获得RNA与蛋白相互作用的信息。
CHIP又叫染色质免疫共沉淀,利用抗原A与DNA B结合,抗原A的抗体把相应的DNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化对目的DNA片段分析,就可以获得蛋白质与DNA相互作用的信息。