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      免疫沉淀(ip)实验:CoIP 、RIP、CHIP的区别

      来源:js3333线路检测中心生物   发布时间:2023-10-08 16:24   点击量:

      IP实验原理

      IP又称免疫沉淀(Immunoprecipitation)  ,是利用抗原和抗体的特异性结合以及“proteinA/G”特异性结合到抗体的FC片段的现象开发出来的方法 ,简单来说 ,抗原与抗体类似于锁和钥匙之间的关系 ,一把钥匙(抗体)只能开一把锁(抗原),而钥匙可以通过钥匙链(细菌蛋白的“proteinA/G”)快速找到。ProteinA/G抗体-目的蛋白复合物从混合液中沉淀下来 ,最后将靶蛋白从磁珠上洗脱,并通过SDS-PAGE ,Western Blot等手段对洗脱下来的蛋白进行分析 。

      免疫沉淀实验原理

      IP是用来富集目的蛋白的 ,那么在生物体内蛋白一般可能会与什么结合呢?

      这个我想大家都知道,那就是DNA、RNA、蛋白质。通过IP的方法富集蛋白 ,检测与其结合的DNA的方法即为ChIP ;通过IP的方法富集蛋白 ,检测与其结合的RNA的方法即为RIP;通过IP的方法富集蛋白,检测与其结合的蛋白的方法即为coIP。

      CoIP又叫免疫共沉淀,利用抗原A与蛋白质B结合,通过A的抗体(钥匙)沉淀A(锁),再利用精制的proteinA(钥匙链)预先结合到磁珠上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后 ,磁珠上的proteinA就能吸附抗体,从而获得抗原A与抗原B的结合体,之后就可以对B检测 ,获得蛋白质之间的相互作用信息。

      免疫共沉淀

      RIP又叫RNA免疫沉淀,利用抗原A与RNA B结合 ,抗原A的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化对RNA进行测序或PCR分析,就可以获得RNA与蛋白相互作用的信息。

      CHIP又叫染色质免疫共沉淀,利用抗原A与DNA B结合,抗原A的抗体把相应的DNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化对目的DNA片段分析,就可以获得蛋白质与DNA相互作用的信息 。


      

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